bradford法测蛋白浓度原理(bradford法测蛋白浓度)
2023-07-21 15:02:00
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导读 大家好,小房来为大家解答以上的问题。bradford法测蛋白浓度原理,bradford法测蛋白浓度这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!1、一
大家好,小房来为大家解答以上的问题。bradford法测蛋白浓度原理,bradford法测蛋白浓度这个很多人还不知道,现在让我们一起来看看吧!
1、一、原理不同BCA蛋白定量:碱性条件下,蛋白将Cu2+还原为Cu+, Cu+与BCA试剂形成紫颜色的络合物,吸光强度与蛋白浓度成正比。
2、测定其在562nm处的吸收值,并与标准曲线对比,即可计算待测蛋白的浓度。
3、Bradford法蛋白定量:在一定的浓度范围内,蛋白质-染料复合物在波长为595nm处的光吸收与蛋白质含量成正比,通过测定595nm处光吸收的增加量可知与其结合蛋白质的量。
4、二、样品中物质含量不同BCA蛋白定量:样品中高达5%的SDS,5%的Triton X-100,5%的Tween 20、60、80。
5、Bradford法蛋白定量:样品中SDS低于0.01%,Triton X-100低于0.05%,Tween 20、60、80低于0.015%。
6、扩展资料BCA蛋白定量的注意事项:BCA蛋白定量时,吸光度可随时间的延长不断加深,且显色反应会随温度升高而加快,故如果浓度较低,适合较高温度孵育or延长孵育时间。
7、2、标准蛋白液的加量应当准确,如果加量不准确,会导致制作出来的标准曲线出现偏差,影响待测样品的浓度计算,所以一方面需要用梯度稀释的方法来配置标准蛋白液,另一方面应使用精确度高的移液枪。
8、3、为加快BCA蛋白定量测定蛋白浓度的速度可以适当用微波炉加热,但切勿过热。
9、 4、当结果出现空白组本身就有较高的背景,可用Bradford法蛋白定量重新测定蛋白浓度。
10、参考资料来源:百度百科-蛋白定量。
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