northern和southern杂交的区别
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1、区别:研究的对象不同。
2、southern主要的对象是DNA,northern研究的对象是RNA,而western研究的对象为蛋白质。
3、Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定序列定位的通用方法。
4、一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的DNA片段,将胶上的DNA变性并在原位将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上,经干烤或者紫外线照射固定,再与相对应结构的标记探针进行杂交,用放射自显影或酶反应显色,从而检测特定DNA分子的含量。
5、2、Northern印迹杂交(Northern blot)。
6、这是一种将RNA从琼脂糖凝胶中转印到硝酸纤维素膜上的方法。
7、与Southern杂交不同的是,总RNA不需要进行酶切,即是以各个RNA分子的形式存在,可直接应用于电泳。
8、3、 Western Blot中文一般称为免疫着色。
9、它是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。
10、其基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过的细胞或生物组织样品进行着色。
11、通过分析着色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析的细胞或组织中的表达情况的信息。
12、扩展资料:杂交流程:Southern印迹杂交技术包括两个主要过程:一是将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定的固相支持物(硝酸纤维素膜或尼龙膜)上,即印迹(blotting);二是固定于膜上的核酸同位素标记的探针在一定的温度和离子强度下退火,即分子杂交过程。
13、2、Northern blot:在变性条件下将待检的RNA样品进行琼脂糖凝胶电泳,继而按照同Southern Blot相同的原理进行转膜和用探针进行杂交检测。
14、3、Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。
15、经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。
16、以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。
本文分享完毕,希望对你有所帮助。